DiI、DiO、DiD、DiR是細胞膜熒光探針親脂性的熒光染料,可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構。這些環(huán)境敏感性熒光染料在進入細胞膜之前熒光非常弱,當與細胞膜結(jié)合后其熒光強度大大增強。且具有消光系數(shù)高、極性依賴性、激發(fā)態(tài)壽命短等特點。一旦進入細胞膜后,可在整個細胞膜上擴散,較佳濃度時可以使整個細胞膜染色。
細胞膜熒光探針應用不同的熒光染色(DiI橙色熒光、DiO綠色熒光、DiD紅色熒光、DiR深紅色熒光)為活細胞多標、流式分析提供了便利:
1、DiO和DiI可分別用標準的FITC濾光片和TRITC濾光片檢測。
2、DiD是DiI的衍生物,具有明顯往紅光遷移的激發(fā)和發(fā)射光譜,可以被633nm He-Ne激光激發(fā),并且具有比DiI更長的激發(fā)和發(fā)射光波長,這一特性使其特別適合標記具顯著自熒光效應的細胞或組織。
3、DiR具強效的近紅外光穿透細胞或組織,并在近紅外區(qū)具較低的自熒光水平,這些特性使其特適用于體內(nèi)成像或示蹤實驗。
顯微鏡檢測:
1、DiD,DiO,DiI,DiR激發(fā)波長與發(fā)射波長;
2、多色染料的同時檢測,濾光器按照以下設定:
?、貲iI和DiO=Omega XF52,Chroma 51004;
②DiI和DiD=Omega XF92,Chroma 51007;
?、跠iI,DiO和DiD=Omega XF93,Chroma 61005。
流式細胞儀的檢測:
DiD、DiO、DiI、DiR和DiS染色的細胞可以分別用經(jīng)典的FL1,F(xiàn)L2,F(xiàn)L3和FL4流式細胞儀檢測。